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表达anti—OD19-OAR协同沉默PD-1的慢病毒载体重构
【出 处】:
【作 者】:
龚玉芳
刘峰
袁海花
姜斌
徐明
上海交通大学医学院附属第九人民医院肿瘤科
上海201999
【摘 要】本研究通过PCR方法扩增含EFla启动子的DNA片段,利用同源重组酶将该DNA片段整合到pGreenPuro—shRNA慢病毒载体CMV启动子下游,获得新的多启动子慢病毒载体pGreenPuro—Dual。同时,在改造的慢病毒载体的CMV启动子下游插人鼠源anti—CD19-CAR片段,并在H1启动子下游EcoRI和BamHI酶切位点之间插入PD-1shRNA片段,重组获得pGreenPuro—Dual/antiCD19-CAR/shRNAPDl慢病毒载体,重组质粒与2个辅助质粒共转染HEK293FT细胞包装重组慢病毒颗粒。利用包装病毒感染HEK293T细胞后,荧光观察病毒感染效率,并提取细胞总蛋白Westernblotting检测anti—CDl9-CAR以及PD-1的表达。结果显示表达anti—CDl9-CAR以及shRNAPD-1的重组慢病毒成功感染了HEK293T细胞,鼠源anti—CD19-CAR成功表达,同时PD-1蛋白被有效沉默。
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