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抗IL-33全人源scFv-Fc抗体的可溶性表达与鉴定
【出 处】:
【作 者】:
王栩
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袁青
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叶迎春
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于红
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徐文峰
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杨燕
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年四季
【摘 要】通过对通用型在细菌中可溶性表达scFv—Fc抗体载体的构建,对抗IL-33全人源scFv—Fc抗体进行可溶性表达并鉴定。扩增人IgG1Fc片段及前期筛选的抗IL-33单链抗体(scFv)DNA,分别插入到改建的载体pLZ16中,构建可溶性重组表达pLZ16-scFv—Fc质粒。将重组质粒转入E.coli DH5aF’,菌落经PCR和测序验证表明我们成功构建了pLZ16-scFv—Fc重组质粒。将阳性克隆子分别于32℃IPTG表达5h或25℃无IPTG表达50h,用HRP标记抗人IgG1Fc抗体进行检测,结果显示25℃无IPTG表达50h时,表达蛋白分泌在细菌周质间,可明显检测到scFv—Fc的可溶性表达1western blotting结果显示,25℃无IPTG表达的seFv—Fc为65kD左右,其可溶性表达量较32℃表达量高。本研究成功构建了pLZ16-scFv—Fc重组质粒,并在E.coliDH5aF’中成功可溶性表达抗IL-33全人源scFvFc抗体。
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