【出 处】： SIRPα CD47 融合蛋白 高亲和力突变体 蛋白纯化

【作 者】： 徐进 [1] ; 刘涛 [2] ; 赵自叶 [3] ; 彭晓芸 [4] ; 夏懋 [2] ; 郭怀祖 [2] ; 张大鹏 [2] ; 钱卫珠 [2] ; 王皓 [2]

【摘 要】制备野生型信号调节蛋白α（SIRPα）胞外段和高亲和力突变体,并进行纯化条件优化与结合活性鉴定。通过全基因合成获得SIRPα-wt和高亲和力突变体SIRPα-cvl的全基因;利用分子克隆技术将其连入表达载体,最终通过大肠杆菌BL21（DE3）工程菌株表达Trx-SIRPα-wt和Trx-SIRPα-cvl两种融合蛋白。通过肠激酶酶切去除融合标签以及多次层析纯化后,利用质谱技术分析目的蛋白所在组分。经SDS-PAGE电泳显示,最终获得了纯度高于90%的SIRPα-wt和SIRPα-cvl,与CD47结合活性结果表明两种蛋白都能与CD47-Fc融合蛋白结合。据此,本研究成功表达并纯化得到了具有配体结合活性的SIRPα-wt和其高亲和力突变体SIRPα-cvl两种重组蛋白。