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重组信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段及其高亲和力突变体的表达、纯化与活性鉴定
【出 处】:
SIRPα
CD47
融合蛋白
高亲和力突变体
蛋白纯化
【作 者】:
徐进
[1] ;
刘涛
[2] ;
赵自叶
[3] ;
彭晓芸
[4] ;
夏懋
[2] ;
郭怀祖
[2] ;
张大鹏
[2] ;
钱卫珠
[2] ;
王皓
[2]
【摘 要】制备野生型信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段和高亲和力突变体,并进行纯化条件优化与结合活性鉴定。通过全基因合成获得SIRPα-wt和高亲和力突变体SIRPα-cvl的全基因;利用分子克隆技术将其连入表达载体,最终通过大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株表达Trx-SIRPα-wt和Trx-SIRPα-cvl两种融合蛋白。通过肠激酶酶切去除融合标签以及多次层析纯化后,利用质谱技术分析目的蛋白所在组分。经SDS-PAGE电泳显示,最终获得了纯度高于90%的SIRPα-wt和SIRPα-cvl,与CD47结合活性结果表明两种蛋白都能与CD47-Fc融合蛋白结合。据此,本研究成功表达并纯化得到了具有配体结合活性的SIRPα-wt和其高亲和力突变体SIRPα-cvl两种重组蛋白。
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