【出 处】： 血管内皮生长因子受体2 酪氨酸激酶 时间分辨荧光免疫分析 高通量药

【作 者】： 朱雪 ; 王柯 ; 黄飚 ; 周彬 ; 张艺 ; 张珏 ; 来兰

【摘 要】利用原核表达系统表达重组蛋白VEGFR-2TK，通过Ni-NTA亲和层析柱纯化获得目的蛋白，以VEGFR-2TK作为靶点，以TRFIA技术作为检测手段，对反应条件进行优化（底物浓度，ATP，离子浓度），建立针对VEGFR-2酪氨酸激酶的高通量药物筛选模型。选取已报道的VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂SU11248对该药物筛选模型进行验证。成功表达及纯化获得高活性VEGFR-2TK重组蛋白，然后经过优化获得高通量药物筛选模型反应条件：VEGFR-2TK最适浓度为250ng／孔，底物PolyE4Y的最佳浓度为10μg／ml，ATP的最佳浓度为60μmol／L，Mg2＋的最佳浓度为40μmol／L，Mn2＋的最佳浓度为20μmol／L。用已知VEGFR-2TK抑制剂SU11248对模型进行验证，IC50为141．6nmol／L，与文献中报道一致。成功构建VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂筛选模型，其灵敏度高，结果稳定，适用于高通量药物筛选。