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人膜型HVEM对T细胞体外增殖和细胞因子分泌的协同刺激作用
【出 处】:
HVEM
转染
T细胞
增殖
【作 者】:
齐嫄
[1] ;
王雪峰
[1,2] ;
黄子逸
[1] ;
朱耿超
[1,2] ;
胡振华
[1] ;
张学光
[1]
【摘 要】建立人协同刺激分子HVEM的基因转染细胞株,探讨膜型HVEM体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。从此前已插入人HVEM编码区全长基因的pMD18-T/HVEM中用PCR法扩增出目的片段,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP/HVEM重组载体,以脂质体法转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,以免疫荧光标记和流式细胞术分析HVEM分子在转染细胞膜上的表达情况,以MTT法和ELISA法测定获得HVEM转染细胞L929体外对T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响。结果:基因转染细胞株L929/HVEM的细胞膜上能稳定高表达人HVEM分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染HVEM基因的L929/mock细胞相比,L929/HVEM能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖,以及促进T细胞IL-2、IFN-γ、IL-10和TNF-α的分泌。建立了稳定高表达人HVEM分子的基因转染细胞株,并发现膜型HVEM体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著促进作用。
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