【出 处】： 乙型肝炎病毒 萤火虫荧光素酶 细胞模型

【作 者】： 梁声强 ; 徐忠玉 ; 胡桂华 ; 许小华 ; 邹鹏程

【摘 要】建立萤火虫荧光素酶（Fluc）为报告基因标记的乙型肝炎病毒（HBV）体外感染的细胞模型。利用分子亚克隆技术,以pAAV/1.2HBV质粒为模板,PCR扩增带有反向重复序列（ITR）的1.2倍HBV基因组片段,反向插入真核表达载体pGL3-CP-Fluc中,构建Fluc标记的HBV基因组表达质粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2,并将此质粒转染至Huh-7细胞中。全自动免疫分析仪进行HBsAg、HBeAg的定量检测,生物发光检测仪检测Fluc其在细胞的表达水平。成功构建了1.2倍HBV全基因真核表达载体,稳定转染Huh-7细胞后,质粒在细胞中高水平表达Fluc,并可以正常分泌HBsAg、HlBeAg。重组质粒pGL3-CP-Fluc-HBV1.2能在Huh-7细胞中表达,其稳定转染的细胞可作为一种新型的HBV体外感染模型,为抗病毒药物研究奠定基础。