【出 处】： 调节性T细胞 anti—CD3 免疫抑制 流式细胞仪 CCK-8

【作 者】： 胡义平 [1,2] ; 刘叔文 [1] ; 李晓娟 [1]

【摘 要】用非放射性同位素方法检测抗CD3抗体诱导的小鼠调节性T细胞（Treg）对效应性T细胞（Teff）增殖的抑制作用。本实验用丝裂霉素c处理脾细胞获得抗原递呈细胞（APC），用免疫磁珠分离BALB／c小鼠脾脏CD4＋CD25＋的Treg和CD4＋CD25-的Teff，二者按1：2比例与APC共培养，并加入anti—CD3抗体刺激3d，加CCK-8孵育检测细胞增殖。另外，CFSE标记Teff，与Treg共同培养，加入anti—CD3抗体刺激3d，流式细胞仪分析Treg对Teff增殖的抑制作用。流式分析表明，0．1mg／L、1mg／L的anti—CD3抗体均能明显促进Teff细胞增殖，加Treg细胞能明显减低细胞增殖的比例和减少增殖的代数。anti—CD3抗体剂量增加到1mg／L，Teff的增殖较0．1mg／L剂量刺激时没有明显改变，但Treg的抑制功能减弱了。CCK-8法与流式检测得出的结果一致。CCK-8法和流式细胞术（FACS）均可以用来检测Treg细胞的免疫抑制作用，并且采用0．1mg／Lanti-CD3抗体刺激，对Treg细胞免疫抑制作用的检测效果更好。