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结核分枝杆菌H37Rv尿嘧啶糖苷酶基因的克隆、表达及酶学性质分析
【出 处】:
结核分枝杆菌
尿嘧啶糖苷酶
表达纯化
表面等离子共振
【作 者】:
徐忠玉
;
林雅宁
【摘 要】本研究旨在构建结核分枝杆菌H37Rv尿嘧啶糖苷酶UNG的原核表达载体及酶学分析,为结核分枝杆菌的碱基切除修复系统的研究奠定基础。提取结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA,PCR法扩增ung基因,构建pQE-30-ung重组质粒,在表达宿主菌E.coliM15中诱导表达蛋白,经Ni2+-NTA亲和层析柱和凝胶过滤层析纯化,通过表面等离子共振试验观察该蛋白与错配DNA结合的情况。结果显示,成功构建了原核表达载体pQE-30-ung,并能在宿主菌E.coliM15中表达,纯化后的酶具有识别异常DNA活性,为进一步研究奠定了基础。
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