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RNAi下调人肺癌B7-H1基因对T细胞免疫学功能的影响
【出 处】:
B7-H1
H1299
RNAi
生物学功能
【作 者】:
黄健
;
李小宁
;
林乃祥
【摘 要】设计与鉴定负性协同刺激分子人B7-H1基因有效RNAi干扰位点,探讨RNAi阻断B7H1分子表达对肺癌细胞株H1299生物学功能的影响。采用流式细胞术分析B7H1基因在人细胞株H1299表面表达特性,应用生物信息学方法分析该基因并设计其RNAi干扰的探针序列,构建含有该干扰序列的重组腺病毒载体,转染细胞株.免疫荧光方法分析细胞表面B7H1的表达变化,在此基础上,应用RNAi转染细胞和T细胞共培养体系分析B7-H1表达受抑后对T细胞效应的影响,CCK-8掺人法和ELISA法分析T细胞增殖和细胞因子产生的变化。与对照组相比,三个B7H1RNA干扰序列对B7H1分子的表达均有一定的抑制效应,其中217-245位干扰序列使细胞表面目的分子表达强度降为45.4%,734-762靶点组目的分子表达强度则降为51.3%,427-455序列对B7-H1分子表达的干扰效应最为显著,使其表达降至18.9%。T细胞功能研究结果显示,抑制效应较强的RNAi作用T细胞后对T细胞负性调控能力弱,细胞增殖能力和细胞网子产生比其他各组强(P〈0.05)。人B7H1基因427-455位进行RNAi干扰具有显著效果,可有效调节靶基因的表达和生物学功能。
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