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小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备
【出 处】:
钙网蛋白
原核表达
抗体制备
【作 者】:
汪龚泽
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刘朝奇
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杨建林
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聂纪芹
【摘 要】钙网蛋白(calreticulin,CRT)是存在于哺乳动物细胞具有高度保守性和多种生物学活性的蛋白,为了更好的研究其生物学活性,本课题组通过PCR方法扩增CRT截短基因,将其克隆到原核表达载体PET-28a(+)中,经大肠杆菌表达并纯化CRT蛋白。以纯化的CRT蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆的CRT血清。进一步采用Western blot、ELISA、流式细胞术等技术对制备的抗体进行初步鉴定。结果显示:原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达CRT蛋白;获得多抗血清应用Western blot鉴定几种细胞株中CRT,流式细胞术检测CRT的外翻现象。因此我们得到结论——成功制备了CRT蛋白及其抗体,并有很好的特异性,能识别人鼠两种源性的CRT。
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