联系我们
人BTLA-Fc融合蛋白的制备及其生物学活性的研究
【出 处】:
B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)
融合蛋白
单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)
T细胞
【作 者】:
朱耿超
[1,2] ;
黄子逸
[1,2] ;
曹丽娟
[1,2] ;
陈永井
[1,2] ;
王雪峰
[1,2] ;
张学光
[1,2]
【摘 要】为建立CHO/BTLA-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌BTLA-Fc融合蛋白,采用PCR法从本单位构建的pEGZ-Term/B7-H1-Fc重组质粒中扩增人IgG1(Fc)恒定区,Xho I、BamH I双酶切后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接为重组质粒pIRES2-EGFP-Fc,同时PCR法从pEGZ-Term/BTLA重组质粒中获得人BTLA胞外段基因片段,用Nhe I、Xho I双酶切插入上述pIRES2-EGFP-Fc构建重组载体pIRES2-EGFP/BTLA-Fc。脂质体法以该重组载体转染鼠CHO细胞,G418筛选并亚克隆化。Protein G亲和层析柱对上清中的融合蛋白进行纯化,Western blot作定性分析。CCK-8检测BTLA-Fc融合蛋白对抗人CD3单抗激发的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染CHO细胞培养上清中表达的BTLA-Fc融合蛋白能与L929/HVEM细胞有效结合,纯化的融合蛋白经Western blot鉴定有清晰的目的条带,而且BTLA-Fc融合蛋白对T细胞的体外增殖具有抑制作用。
相关热词搜索:
上一篇:人白介素17F真核蛋白表达及促炎症作用的研究
下一篇:表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗的构建及其活性鉴定