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酶切位点缺失的跨膜型TNF-α突变体的构建及其功能的研究
【出 处】:
tmT
NF-α
酶切位点
胞毒
【作 者】:
陈克清
[1] ;
刘牧云
[2] ;
刘涛
[1] ;
于敏
[1] ;
冯玮
[1] ;
姜晓丹
[1] ;
李卓娅
[1] ;
王晶
[1]
【摘 要】采用重叠PCR技术,构建TNF转化酶(TACE)酶切位点缺失的Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体,并构建Δ1-12tmTNF-α-pcDNA3.0和Δ1-9,K11EtmTNF-α-pcDNA3.0重组质粒。通过ELISA、MTT、Western blot技术,研究2种突变体生物学功能的变化。结果显示Δ1-12tmTNF-α和Δ1-9,K11EtmTNF-α都不能被TACE剪切,Δ1-12tmTNF-α的胞毒效应明显低于野生型,且不能诱导NF-κB活化。而Δ1-9,K11EtmTNF-α既保留了野生型tmTNF-α的胞毒效应,又能诱导NF-κB活化。以上表明Δ1-9,K11EtmTNF-α突变体既丧失被酶解的能力,又能保留tmTNF-α正反向信号传递能力,为进一步研究tmTNF-α生物学功能提供了有力的工具。
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